石蜡切片如何快速操作完成?
(一)应用范围
(1)替代冷冻切片,在没有条件制作冷冻切片的单位,用作术中诊断;
(2)快速诊断:适用于门诊外地患者,1天可取报告。
(二)切片制作
(1) 将送检的各类组织按《规范》(一)编号登记、眼观、描述记录后,用大头针和羊皮纸包好,投入配制好的固定液烧杯内5~10min(固定液配制:95%乙醉85ml,甲醛10ml,冰醋酸5ml);若组织较厚,可在预固定后修薄,重复固定;
(2)无水乙醇、丙酮脱水3~5min;
(3)浸蜡5min;
(4)常规石蜡包埋,或封固于预制好的蜡块内;
(5)常规HE加温染色。
(三)注意事项
(1) 制作快速石蜡切片全过程过程均加温在65~72℃范围内操作,可用快速组织处理仪、或在恒温水浴锅或恒温箱内完成;
(2) 替代冷冻切片可随到即做,一般在30min内完成;若成批操作,则可根据标本的数量多少,酌情延长时间;
(3) 制作快速石蜡切片,操作人员必须经过一段时间的训练和摸索,在取得一定经验、技术较熟练能保证切片质量后,方可受理对外服务,以把好质量关
石蜡切片的制作方法?
肠道的石蜡切片的制作
(1) 取材:用锋利的刀切取罗非鱼的一小段前肠(据胃5cm左右位置的前肠),组织块的规格为 3~5mm×3~5mm×10~15mm。
(2) 固定:采用Bouin氏固定液装瓶固定,固定液用量一般为组织块体积的10~20倍。
(3) 冲洗:固定12~24h后,将材料自固定液中取出后,在70%酒精中换洗几次,可在酒精中加几滴氨水至洗去黄色为止。
(4) 脱水:70%酒精(1h)→80%酒精(1h)→90%酒精(1h)→95%酒精(1h)→无水乙醇Ⅰ(1h)→无水乙醇Ⅱ(1h)
(5) 透明:无水乙醇与二甲苯溶液(1:1)(1h)→二甲苯Ⅰ(1h)→二甲苯Ⅱ
(1h)
(6) 浸蜡:浸蜡的全过程应在恒温设备中进行,将恒温箱调至58℃。
二甲苯与石蜡混合液(1:1)(1h)→石蜡Ⅰ(1h)→石蜡Ⅱ(1h)
浸蜡必须彻底,否则组织内残留透明剂会造成切片过程的困难和影响切片
的质量。
(7) 包埋:在小纸盒内注入溶化的石蜡,将已浸蜡的组织块置入其内,使蜡块迅速冷却硬固,组织块在蜡块中可长期保存。
(8) 切片:包埋后的组织块经修整后,用切片机切成5~7μm的石蜡带。
(9) 粘片:将组织石蜡带在50摄氏度的温水中展片,然后用经1%HCl溶液处理干净的载玻片捞片,组织带即可粘在载玻片上。
(10) 烤片:将粘好的载玻片置于35℃左右的温箱中烤干,待2~3小时后,即可取下编号。
(11) 苏木精—伊红染色:将烤干的片进行染色。
①脱蜡:将烤干的切片放入二甲苯(I)10min→二甲苯(Ⅱ)10rain。
②复水:将脱蜡后的切片移入100%酒精5min→95%酒精5min→85%酒精5min→70%酒精5min→蒸馏水5min
③HE染色显示肠道黏膜上皮内淋巴细胞:将蒸馏水洗涤后的切片移入Harris苏木精液中,10min,使细胞核着色;用自来水洗去切片上残余染液;用1%的盐酸酒精分色3秒;用自来水浸洗3h,显微镜下观察,直到胞核蓝化为止;然后切片入曙红溶液中染色5min,使细胞质着色。经95%酒精与100%酒精脱水,二甲苯透明后,中性树胶封片。
④奥新兰一沙黄染色显示肠道内肥大细胞:切片常规脱蜡下行至蒸馏水→奥新兰一沙黄液染色15~20min→蒸馏水速洗,镜检→95%和100%酒精分色脱水1—2min→二甲苯透明→中性树胶封片。
⑤阿利新兰醋酸染色显示肠道内杯状细胞:切片经脱蜡下行入蒸馏水→阿利新兰醋酸染色10min→蒸馏水洗→1%高碘酸水液氧化5min→蒸馏水略洗一Schiff试剂染色(37℃恒温箱)30min→普通水洗3次→蒸馏水2min→Ehrlich苏木精染色5min→95%酒精和100%酒精脱水→二甲苯透明,中性树胶封片。
切片经脱蜡下行入水:二甲苯(30 min)一二甲苯(10 min)一无水乙醇(5 min)一无水乙醇(5 min)一
95% 乙醇(5 min)一85%乙醇(5 min)一70% 乙醇(5 min)一流水冲洗(20 min)。人Ehrlich苏木精染
色12 min,蒸馏水速洗。盐酸酒精分色,镜检控制时间。入伊红染色2 min,蒸馏水略洗。盐酸酒精分色,镜检控制时间。经95%酒精与无水酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封片。
阿利新兰—番红复合染色液的方法称Scaba法
阿利新兰—番红分别染色的方法称Spicer法
请问眼球的石蜡切片和冰冻切片有什么区别?各有什么优缺点?
1.冰冻切片 是免疫组织化学染色中最常用的一种切片方法。其最突出的优点是能够较完好地保存多种抗原的免疫活性,尤其是细胞表面抗原更应采用冰冻切片。新鲜的组织及已固定的组织均可作冰冻切片。
冰冻时,组织中水份易形成冰晶,往往影响抗原定位。一般认为冰晶少而大时,影响较小,冰晶小而多时,对组织结构损害较大,在含水量较多的组织中上述现象更易发生。冰晶的大小与其生长速率成正比,而与成核率(形成速率)成反比,即冰晶形成的数量愈多则愈小,对组织结构影响愈严重。因此,应尽量降低冰晶的数量。Fish认为冰冻开始时,冰晶成核率较慢,以后逐渐增加,其临界温度为-33。C,从-30。C降至-43。C之间,成核率急剧增加达1018,然后再减慢。基于上述理论可采取以下措施减少冰晶的形成
2.石蜡切片 其优点是组织结构保存良好,在病理和回顾性研究中有较大的实用价值,能切连续薄片,组织结构清晰,抗原定位准确。用于免疫组化技术的石蜡切片制备与常规制片略有不同:①脱水、透明等过程应在4℃。C下进行,以尽量减少组织抗原的损失。②组织块大小应限于2cm×1.5cm×0.2cm,使组织充分脱水、透明、浸蜡。③浸蜡、包埋过程中,石蜡应保持在60℃以下,以溶点低的软蜡最好(即低温石蜡包埋)。
石蜡切片的优缺点
石蜡切片的优点,能得到比较薄的连续切片..缺点,操作比较繁琐,时间比较长..
石蜡切片与冷冻切片的区别是什么
简单的说,石蜡切片是标本要这固定后经脱水,浸蜡后才能用于切片,冷冻切片是直接把标本放在切片机上使它即刻冰冻,就可以切片了.再简单的说一种是要经过很多工序才能用于切片,一种是直接用于切片.
石蜡切片问题·
是一部分切碎,还是全部是粉末的,1)石蜡切片一般是7、8微米,如果组织能看清的话适当加厚一点会不会好一点,2)刀片一定要锋利,从一边用向另一边,3)切得什么茎秆,是不是茎杆表皮太硬,有没有进行软化4)还有可能100%酒精脱水或二甲苯中时间过长,材料太脆了,我能想到的只能这些了,希望有帮助
如何制作石蜡切片?
[1]请教丁老师如何制作皮肤的石蜡切片
一 皮肤组织标本制作及常用染色方法概述
皮肤组织标本常规以福尔马林固定,石蜡包埋,苏木素-伊红(Hematoxylin eosin HE)染色。皮肤组织的制片及染色技术与普通病理相同:标本固定-水洗-硬化、脱水-透明-包埋-切片-染色。但皮肤组织亦有其自身特点,如表皮细胞层次多,纤维及脂肪组织丰富,在取材及固定方面有其特殊性,制片及染色过程也应注意其特点,以提高制片质量。
二 取材
a取材要足够大,应包括一小部分正常组织,以便与病理组织对照,因许多皮肤病的典型病变在真皮深层或皮下组织,故还应包括皮下组织,
b多数情况下应选择充分发展的损害,早期损害常为非特异性,晚期损害的病变大都处于恢复或变性、坏死阶段,充分发展的损害容易找到典型病变而明确诊断,还应尽量选择损害的活动边缘部分,中央部分可能病变已趋向于消退而找不出典型病变。对于水疱性、脓疱性以及含有病原体的损害应取早期损害,否则,若发生继发性改变(如变性、再生或继发性感染)可能隐蔽了重要病变的组织形态,同时,很难辨别病变形成的过程,
c尽量避免切除腋窝或腹股沟等部位皮肤组织,因该处皮肤由于磨擦,搔抓等常有萎缩,
d如疑有血管性或血液性疾患,最好不要取下肢标本,因下肢常有血液停滞或其它肢端血管病,皮内可能有含铁血黄素沉着,
e对某些肿瘤,如角化棘皮瘤,Spitz痣等,应尽可能将肿瘤全部切除,若不能全部切除,则最好自肿瘤中心至边缘取一楔形标本,以供组织学检查。
三 固定
切下皮肤愈早固定愈好,夏天超过4小时,冬天超过24小时,标本体积就要收缩变形或发生自溶。常用固定液为10%中性福尔马林,其总体积应为组织块总体积的7~10倍,用10%福尔马林固定小块组织(1.5 cm×1.5 cm×0.2cm)数小时即可,时间稍长对制片影响不大,随着温度的增高可缩短固定时间,对固定时间过长的标本,可在制作切片时,用流水冲洗24小时,甚至48小时,以免影响染色效果。
四 脱水、包埋、切片及染色
皮肤组织常用酒精脱水、二甲苯透明、石蜡包埋,切片厚度一般为5μm~7μm,与普通病理切片操作程序相同。HE染色法方便、经济,结果稳定,95%以上的组织切片都可以在HE染色下作出诊断,是皮肤组织病理最常用的方法。
[2]http://www.pathology-home.com/html/pathology/20051207_1.asp
自己点进去看吧,太多了 复制不了
制作石蜡切片 一般需要那些耗材 详细一点 谢谢了
石蜡切片机、恒温蜡箱、载玻片、盖玻片;乙醚、无水乙醇、甲醛、冰醋酸、苦味酸、重铬酸钾、锇酸、正丁醇、二甲苯、石蜡、甘油、加拿大树胶
凡士林里面的“切片石蜡”是什么东西?
石蜡的用途是十分广泛的.将纸张浸入石蜡后就可制取有良好防水性能的各种蜡纸,可以用于食品、药品等包装、金属防锈和印刷业上;石蜡加入棉纱后,可使纺织品柔软、光滑而又有弹性;石蜡还可以制得洗涤剂、乳化剂、分散剂、增塑剂、润滑脂最等. 所以切片石蜡主要是指把石蜡切片弄碎,增加凡士林的润滑感
如何制作共聚焦显微镜的细胞切片
如何制作共聚焦显微镜的细胞切片
石蜡切片法 :
石蜡切片法是以石蜡作包埋剂,用旋转切片机将材料切成薄片,经一系列处理制成永久制片的方法.在研究植物的细胞,组织,胚胎以及形态等方面石蜡切片法是最理想的制片方法.
石蜡切片法的一般流程为:取材→固定→抽气→洗涤→脱水→透明→浸蜡→包埋→修块→切片→粘片→染色→封片.
取材
用锋利的刀片切取新鲜的植物材料,选定适宜的材料,立即固定.
取材的注意事项如下:
(1)取材料要新鲜.动作要迅速,以免挤压损坏组织;取病理材料时,应设置对照材料.
(2)所取材料大小要适当:根和茎一般直径≤5mm,切取成5-10mm小段;叶片一般取过中脉处,切成2-5mm宽,5-8mm长.在切材料时,必须注意刀片与中轴成直角,两切面平行,否则制成的切片细胞是斜的. 雌,雄蕊一般不需分割.
(3)取材时间可根据切片要求有所区别.如:在进行植物发育的研究过程时,需要找到细胞分裂相,一般在晴天的早晨9:00-10:00时取材,此时植物细胞分裂活动较明显.
(4)取材不易过老,否则制片有难度(过老的材料须在滑走切片机上进行);对纵切的材料适当多取材,如根尖,茎尖等,因为切到材料正中的概率较低.
(二)固定
将已切好的材料尽快地浸入相当于材料10-15倍体积的固定液中.借助固定液的作用,使细胞的新陈代谢瞬时停止,并保持细胞或组织的形态构造及其内含物的状态不发生变化.从而达到使组织变硬从而便于切片,增强内含物的折光度,令细胞易于着色的目的,同时具有防腐作用.以新鲜配制固定液效果较好.固定的时间依材料的种类,性质,大小等而定.材料固定完毕,保存于加盖的容器内,贴上标签.
良好的固定剂,应是穿透力强,使细胞立刻致死,原生质全部凝固;不发生任何变形,增强折光率,并且不妨碍染色.
常用固定液:
简单固定液 以一种化学药品配制的固定液.