石蜡切片的制作方法？
肠道的石蜡切片的制作
（1） 取材：用锋利的刀切取罗非鱼的一小段前肠（据胃5cm左右位置的前肠），组织块的规格为 3～5mm×3～5mm×10～15mm。
（2） 固定：采用Bouin氏固定液装瓶固定，固定液用量一般为组织块体积的10～20倍。
（3） 冲洗：固定12～24h后，将材料自固定液中取出后，在70%酒精中换洗几次，可在酒精中加几滴氨水至洗去黄色为止。
（4） 脱水：70%酒精（1h）→80%酒精（1h）→90%酒精（1h）→95%酒精（1h）→无水乙醇Ⅰ（1h）→无水乙醇Ⅱ（1h）
（5） 透明：无水乙醇与二甲苯溶液（1:1）（1h）→二甲苯Ⅰ（1h）→二甲苯Ⅱ
（1h）
（6） 浸蜡：浸蜡的全过程应在恒温设备中进行，将恒温箱调至58℃。
二甲苯与石蜡混合液（1:1）（1h）→石蜡Ⅰ（1h）→石蜡Ⅱ（1h）
浸蜡必须彻底，否则组织内残留透明剂会造成切片过程的困难和影响切片
的质量。
（7） 包埋：在小纸盒内注入溶化的石蜡，将已浸蜡的组织块置入其内，使蜡块迅速冷却硬固，组织块在蜡块中可长期保存。
（8） 切片：包埋后的组织块经修整后，用切片机切成5~7μm的石蜡带。
（9） 粘片：将组织石蜡带在50摄氏度的温水中展片，然后用经1%HCl溶液处理干净的载玻片捞片，组织带即可粘在载玻片上。
（10） 烤片：将粘好的载玻片置于35℃左右的温箱中烤干，待2~3小时后，即可取下编号。
（11） 苏木精—伊红染色：将烤干的片进行染色。
①脱蜡：将烤干的切片放入二甲苯(I)10min→二甲苯(Ⅱ)10rain。
②复水：将脱蜡后的切片移入100％酒精5min→95％酒精5min→85％酒精5min→70％酒精5min→蒸馏水5min
③HE染色显示肠道黏膜上皮内淋巴细胞：将蒸馏水洗涤后的切片移入Harris苏木精液中，10min，使细胞核着色；用自来水洗去切片上残余染液；用1％的盐酸酒精分色3秒；用自来水浸洗3h，显微镜下观察，直到胞核蓝化为止；然后切片入曙红溶液中染色5min，使细胞质着色。经95％酒精与100％酒精脱水，二甲苯透明后，中性树胶封片。
④奥新兰一沙黄染色显示肠道内肥大细胞：切片常规脱蜡下行至蒸馏水→奥新兰一沙黄液染色15～20min→蒸馏水速洗，镜检→95％和100％酒精分色脱水1—2min→二甲苯透明→中性树胶封片。
⑤阿利新兰醋酸染色显示肠道内杯状细胞：切片经脱蜡下行入蒸馏水→阿利新兰醋酸染色10min→蒸馏水洗→1％高碘酸水液氧化5min→蒸馏水略洗一Schiff试剂染色（37℃恒温箱）30min→普通水洗3次→蒸馏水2min→Ehrlich苏木精染色5min→95％酒精和100％酒精脱水→二甲苯透明，中性树胶封片。
切片经脱蜡下行入水：二甲苯(30 min)一二甲苯(10 min)一无水乙醇(5 min)一无水乙醇(5 min)一
95％ 乙醇(5 min)一85％乙醇(5 min)一70％ 乙醇(5 min)一流水冲洗(20 min)。人Ehrlich苏木精染
色12 min，蒸馏水速洗。盐酸酒精分色，镜检控制时间。入伊红染色2 min，蒸馏水略洗。盐酸酒精分色，镜检控制时间。经95％酒精与无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。
阿利新兰—番红复合染色液的方法称Scaba法
阿利新兰—番红分别染色的方法称Spicer法
石蜡切片如何快速操作完成？
（一）应用范围
（1）替代冷冻切片，在没有条件制作冷冻切片的单位，用作术中诊断；
（2）快速诊断：适用于门诊外地患者，1天可取报告。
（二）切片制作
（1） 将送检的各类组织按《规范》（一）编号登记、眼观、描述记录后，用大头针和羊皮纸包好，投入配制好的固定液烧杯内5~10min(固定液配制：95％乙醉85ml，甲醛10ml，冰醋酸5ml)；若组织较厚，可在预固定后修薄，重复固定；
（2）无水乙醇、丙酮脱水3~5min；
（3）浸蜡5min；
（4）常规石蜡包埋，或封固于预制好的蜡块内；
（5）常规HE加温染色。
（三）注意事项
（1） 制作快速石蜡切片全过程过程均加温在65~72℃范围内操作，可用快速组织处理仪、或在恒温水浴锅或恒温箱内完成；
（2） 替代冷冻切片可随到即做，一般在30min内完成；若成批操作，则可根据标本的数量多少，酌情延长时间；
（3） 制作快速石蜡切片，操作人员必须经过一段时间的训练和摸索，在取得一定经验、技术较熟练能保证切片质量后，方可受理对外服务，以把好质量关
如何制作石蜡切片?
[1]请教丁老师如何制作皮肤的石蜡切片
一 皮肤组织标本制作及常用染色方法概述
皮肤组织标本常规以福尔马林固定，石蜡包埋，苏木素－伊红(Hematoxylin eosin HE)染色。皮肤组织的制片及染色技术与普通病理相同：标本固定－水洗－硬化、脱水－透明－包埋－切片－染色。但皮肤组织亦有其自身特点，如表皮细胞层次多，纤维及脂肪组织丰富，在取材及固定方面有其特殊性，制片及染色过程也应注意其特点，以提高制片质量。
二 取材
a取材要足够大，应包括一小部分正常组织，以便与病理组织对照，因许多皮肤病的典型病变在真皮深层或皮下组织，故还应包括皮下组织,
b多数情况下应选择充分发展的损害，早期损害常为非特异性，晚期损害的病变大都处于恢复或变性、坏死阶段，充分发展的损害容易找到典型病变而明确诊断，还应尽量选择损害的活动边缘部分，中央部分可能病变已趋向于消退而找不出典型病变。对于水疱性、脓疱性以及含有病原体的损害应取早期损害，否则，若发生继发性改变(如变性、再生或继发性感染)可能隐蔽了重要病变的组织形态，同时，很难辨别病变形成的过程,
c尽量避免切除腋窝或腹股沟等部位皮肤组织，因该处皮肤由于磨擦，搔抓等常有萎缩,
d如疑有血管性或血液性疾患，最好不要取下肢标本，因下肢常有血液停滞或其它肢端血管病，皮内可能有含铁血黄素沉着,
e对某些肿瘤，如角化棘皮瘤，Spitz痣等，应尽可能将肿瘤全部切除，若不能全部切除，则最好自肿瘤中心至边缘取一楔形标本，以供组织学检查。
三 固定
切下皮肤愈早固定愈好，夏天超过4小时，冬天超过24小时，标本体积就要收缩变形或发生自溶。常用固定液为10％中性福尔马林，其总体积应为组织块总体积的7～10倍，用10％福尔马林固定小块组织(1.5 cm×1.5 cm×0.2cm)数小时即可，时间稍长对制片影响不大，随着温度的增高可缩短固定时间，对固定时间过长的标本，可在制作切片时，用流水冲洗24小时，甚至48小时，以免影响染色效果。
四 脱水、包埋、切片及染色
皮肤组织常用酒精脱水、二甲苯透明、石蜡包埋，切片厚度一般为5μm～7μm，与普通病理切片操作程序相同。HE染色法方便、经济，结果稳定，95％以上的组织切片都可以在HE染色下作出诊断，是皮肤组织病理最常用的方法。
[2]http://www.pathology-home.com/html/pathology/20051207_1.asp
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小鼠肝组织石蜡切片具体怎么做？
一般来说是要的，但也要根据具体实验要求决定（比如你要观察一些什么东西啦，对结构的完整性要求有多高啦）甲醛能固定一般组织，但溶解肝糖和色素。
注意：1.材料必须新鲜，搁置时间过久则产生蛋白质分解变性，导致细胞自溶及细菌的滋生，而不能反映组织活体时的形态结构。
2.固定液的种类很多，其对组织的硬化收缩程度以及组织内蛋白质、脂肪、糖类等物质的e799bee5baa6e79fa5e98193e4b893e5b19e31333239306636作用各不相同。例如纯酒精可固定肝糖而能溶解脂肪，甲醛能固定一般组织，但溶解肝糖和色素。固定液可分为单一固定液及混合固定液。前者有甲醛（蚁醛、福尔马林）、酒精、醋酸或冰醋酸、升汞、锇酸（四氧化锇）、重铬酸钾及苦味酸等，单一固定液不能固定细胞中的所有成分；混合固定液可以互补不足，常用的混合固定液有Bouin氏液、Zenker氏液、FAA液、Carnoy氏液、SuSa液（配方见有关技术书籍）。
过程：
1.取材
2.固定
3.洗涤与脱水
4.透明
5.浸蜡与包埋
6.切片
7.贴片与烤片
8.切片脱蜡及水化
9.染色
10.切片脱水、透明和封片
切片刀的锐利与否、蜡块硬度适当都直接影响切片质量，可用热水或冷水等方法适当改变蜡块硬度。通常切片厚度为4～7微米，切出一片接一片的蜡带，用毛笔轻托轻放在纸上。
小鼠脾脏石蜡切片如何制作
你碰对人了,正好我这些天在做假复层立方上皮的切片 其实切片很好做,最关键的就是你的切片机切出的薄厚怎么样 下面我给你说说程序:1、取材与固定:
小鼠肺石蜡切片如何制作
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其实切片很好做,最关键的就是你的切片机切出的薄厚怎么样
下面我给你说说程序:
1、取材与固定：?
从人或动物新鲜尸体上取下组织块(一般厚度不超过0．5厘米)投入预先配好的固定液中(10％福尔马林，Bouin氏固定液等)使组织、细胞的蛋白质变性凝固，以防止细胞死后的自溶或细菌的分解，从而保持细胞本来的形态结构。?
2、脱水透明：
一般用由低浓度到高浓度酒精作脱水剂，逐渐脱去组织块中的水份。再将组织块置于既溶于酒精，又溶于石蜡的透明剂二甲苯中透明，以二甲苯替换出组织块的中酒精，才能浸蜡包埋。
?3、浸蜡包埋：
将已透明的组织块置于已溶化的石蜡中，放入溶蜡箱保温。待石蜡完全浸入组织块后进行包埋：先制备好容器(如折叠一小纸盒)，倒入已溶化的石蜡，迅速夹取已浸透石蜡的组织块放入其中。冷却凝固成块即成。包埋好的组织块变硬，才能在切片机上切成很薄的切片。
?4、切片与贴片：?
将包埋好的蜡块固定于切片机上，切成薄片，一般为5—8微米厚。切下的薄片往往皱折，要放到加热的水中烫平，再贴到载玻片上，放45℃恒温箱中烘干。
?5、脱蜡染色：?
常用HE染色，以增加组织细胞结构各部分的色彩差异，利于观察。苏木精(Hematoxylin，H)是一种碱性染料，可将细胞核和细胞内核糖体染成蓝紫色，被碱性染料染色的结构具有嗜碱性。伊红(Eosin，E)是一种酸性染料，能将细胞质染成红色或淡红色，被酸性染料染色的结构具有嗜酸性。染色前，须用二甲苯脱去切片中的石蜡，再经由高浓度到低浓度酒精，最后入蒸馏水，就可染色。
HE染色过程是：?
①将已入蒸馏水后的切片放入苏木精水溶液中染色数分钟。?
②酸水及氨水中分色，各数秒钟。?
③流水冲洗1小时后入蒸馏水片刻。?
④入70％和90％酒精中脱水各10分钟。?
⑤入酒精伊红染色液染色2—3分钟。
?6、脱水透明：?
染色后的切片经纯酒精脱水，再经二甲苯使切片透明。
?7、封固：?
将已透明的切片滴上加拿大树胶，盖上盖玻片封固。待树胶略干后，贴上标笺，切片标本就可使用
希望能帮的上你的忙啊
如何制作切片标本？
最为广泛应用的方法:石蜡切片 不仅用于观察正常细胞组织的形态结构，也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法，而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。教学中，光镜下观察切片标本多数是石蜡切片法制备的。活的细胞或组织多为无色透明，各种组织间和细胞内各种结构之间均缺乏反差，在一般光镜下不易清楚区别出；组织离开机体后很快就会死亡和产生组织腐败，失去原有正常结构，因此，组织要经固定、石蜡包埋、切片及染色等步骤以免细胞组织死亡，而能清晰辨认其形态结构。
石蜡切片制作基本技术 石蜡切片法包括取材、固定、洗涤和脱水、透明、浸蜡、包埋、切片与粘片、脱蜡、染色、脱水、透明、封片等步骤。一般的组织从取材固定到封片制成玻片标本需要数日，但标本可以长期保存使用，为永久性显微玻片标本。
谁有组织切片的制作过程
一、制备显微标本的切片62616964757a686964616fe4b893e5b19e31333330323262法
一石蜡包埋切片制作法
这是最常用的切片法。以石蜡作为组织的填充支持介质，将整块组织加以包埋，最后凝固成均匀一致的固态结构。用切片机制取极薄的切片。为了让石蜡能浸入组织内部，需将组织经过脱水等处理。过程大致如下：
⑴固定：生物标本脱离机体或培养环境，细胞会发生自溶，腐败分解。因此，需用固定剂处理，使蛋白质凝固停止濒死或死后变化。凡供永久保存的标本都需经固定处理。
常用的固定剂是甲醛、乙醇等，能使蛋白质凝固。还有由几种试剂配成的固定液，例如Carnoy固定液，由无水酒精、氯仿、冰醋酸配成，固定力更快更强，不含水分，可避免水溶性物质如糖原等在固定过程中损失。
⑵脱水：是将组织细胞所含水分除去。通常用乙醇（Alcohol，酒精），浓度递升到 100%。此过程还使组织块进一步硬化。
⑶透明：是用既能溶于纯酒精又能融解石蜡的有机溶剂，将组织中的酒精取代，以便石蜡浸入。通常用二甲苯（xylene）为透明剂。
⑷浸蜡：在温箱内进行。已透明的组织块放入加热融解的石蜡中，让石蜡浸透组织，作为支持介质。
⑸包埋：将已浸蜡的组织块放入热融的包埋石蜡中，迅速冷凝，组织决便被蜡包埋。
⑹切片：用切片机。常用的切片机有轮转式、平推式的。用轮转式的易于切出连续切片。切片厚度随制片目的而调整。教学标本厚度多是5~6μm。
⑺贴片烤干：石蜡切片在温水上展平后，移在玻片上，烤干，即可供染色处理。染色后用树胶、盖坡片封固，可永久保存。
二冷冻切片法
冷冻切片法是借组织在低温下，冻结变硬而达到符合切片要求。冷冻切片法需有冷冻切片机，或在普通切片上配制冷设施。恒冷切片机是高级冷冻切片设备。它有一个恒冷箱，标本致冷台和切片机都装在箱内。恒冷箱的作用类似冰箱，可在一定范围内调整温度，其结构有利于保持箱内恒定低温，减少箱门打开时环境温度的干扰。切片机的轮转把手装在箱外，便于操纵切片。
冷冻切片法的优点是：在处理得当时，它可以最大限度地保持组织的新鲜状态。并且，由于不需经脱水、透明、浸蜡等过程中有机溶剂的处理，及湿箱浸蜡热的影响，甚至可不经固定。所以能很好地保存组织细胞的各种成分和酶的活性，因此在酶的组织化学研究中常用此切片法。
二、显示标本结构成分的染色法
一苏木素伊红染色法（HE染色法）
为最常用的染色法。该法应用于各种组织的染色，是组织学技术的基本方法，对任何液体固定的组织和各种包埋的切片均可使用，只是对不同包埋的切片法处理略有不同。下面简介石蜡包埋切片的HE染色法。
1、脱蜡：石蜡切片的组织内部充满石蜡，不能使水溶性染液着色，因此在染色前必须首先用二甲苯将石蜡脱掉，共两次。
2、下行入水：将已脱蜡的标本浸入无水酒精及各级酒精，使组织逐步接近水。3、蒸馏水略洗。
4、苏木素溶液染色约5—15分钟
5、自来水洗去多余染料。
6、入稀释的盐酸酒精溶液中分色，边分色边镜检，至核呈红紫色，细胞质无
色为合适。
7、分色后用自来水或加数滴氨水碱化，直至细胞核变成蓝色。这一步骤也可称为“蓝化”。
8、入蒸馏水洗去碱性水分。
9、入70%酒精→80%酒精各5分钟。
10、入伊红染液染色30秒至数分钟。
11、以95%酒精对伊红分色，至胞浆，结缔组织等呈桃红色。
12、上行脱水：染色后的切片，因组织内含水而不透明，不能清晰地观察其微细结构。因此，须将组织内的水分经各级酒精→无水酒精逐步置换，最后进入不含水份的透明剂内。
13、透明：入二甲苯透明剂，二次（各数分钟）。
14、取出切片：将组织周围多余的二甲苯擦去，滴树胶后加盖玻片封固。
结果：细胞核蓝紫色，胞浆、胶原纤维、肌纤维为桃红色，嗜酸性颗粒为鲜红色，弹性纤维呈明亮桃红色。
二组织化学和细胞化学染色法
组织化学和细胞化学，是将物理和化学的技术运用到组织标本，用显微镜和化学分析方法来研究组织和细胞内的化学成分，并观察该化学成分在组织、细胞内的定位、含量及其变化规律。这些化学成分借着化学反应所产生的不溶性着色物质来显示。对于某些化学成分，例如：Fe++糖原、核酸等，可以用直接或间接的化学反应产生着色沉淀而显示其部位和相对含量。对于酶类，显示它的活性，须有该种酶的底物（被该种酶作用的物质），由酶对底物的分解，直接或间接地生成着色物质而被显示。凡是在光学显微镜下观察细胞原位显示的化学物质，称组织化学，若用电镜观察细胞原位化学成分的着色部位，则称电镜细胞化学，下面从原理方面简要介绍几种常用的组织化学染色技术：
1、显示琥珀酸脱氢酶（SDH）活性的硝基-BT法：
（Succinate dehydrogenase）
⑴酶的定位及生物学意义：
琥珀酸脱氢酶是线粒体标志酶，其存在于所有有氧呼吸的细胞，和线粒体内膜紧密结合。该酶不需辅酶而自身有黄素蛋白（FP,Flavoprotein）为辅基。在组化反应中常用来反映三羧酸循环的情况。其催化过程如下：
弱-单甲（紫红色）
HOOC-CH2-CH2-COOHFPH2四唑（甲）↓
（有色）强-双甲（深紫蓝色）
（琥珀酸）（黄素蛋白）
HOOC-CH=CH=COOHFPH2四唑（无色）
（延胡索酸）
⑵原理：上述的反应最后一步的原理是，硝基-BT（Nitro-blue tetrozolyum，四唑氮蓝）系异环族化合物四唑盐，当它接受氢时，本身被还原为有色沉淀产物（甲
）（Formazan）。
⑶孵育液配制：
A液（贮备液）
0.2M磷酸缓冲液（PH7.6）10ml等量混合
0.2M琥珀酸钠（S01.succinate） 10ml备用
B液：
硝基四唑（Nitro-Br）2mg
2ml
0.2M磷酸缓冲液（PH7.6） 2ml
取：A液2ml
B液2ml孵育液
聚乙烯吡烷酮（PVP） 300mg
⑷方法：
①新鲜恒冷箱冷冻切片，厚6~8μm，平贴在盖玻片上。
②滴染法：将有冷冻切片的盖玻片（标本面朝上）平放于预热好的培养皿中（底部垫一湿滤纸），滴加孵育液至全部覆盖组织，于37℃温箱中孵育45~60分钟（肝，心肌组织15分钟即可）。
③于生理盐水中冲洗二次（轻晃，以防脱片）。
④10%福尔马林生理盐水固定10分钟。
⑤15%酒精浸洗5分钟（换二次）。
⑥甘油明胶封片。
⑸结果：酶活性强处呈蓝色颗粒（双甲沉淀），酶活性较低时形成紫红色单甲。在光镜下，该酶活性于肝小叶内分布呈明显分带现象，周边带强于中央带。在心肌细胞纵切面，酶活性颗粒沿心肌细胞长轴整齐排列，相邻心肌细胞的空白处为闰盘。
2、显示葡萄糖-6-磷酸酶（G-6-Pase）活性的铅法：
（Glucosel-phosphate phosphohydrolase）
①酶的定位及其生物学意义：
该酶主要位于内质网，是内质网的标志酶。G-6-Pase参与糖代谢，能水解葡萄糖-6-磷酸而释放出葡萄糖和磷酸。
⑵原理：G-6-Pase将底物（葡萄糖-6-磷酸钾盐）水解产生磷酸离子，后者被孵育液中的硝酸铅所捕获，最终反应物为颗粒状的硫化铅沉淀，其反应式如下：
酶Pb(NO3)2
葡萄糖-6-磷酸钾+H2O葡萄糖+磷酸
(NH4)2S
Pb2(PO4)2PbS↓
(无色)（棕色）
（试剂配制及方法详见组织学技术专著）
⑶结果：酶活性部位呈棕色硫化铅颗粒沉淀。在光镜下G-6-Pase活性颗粒较均匀地分布于胞质中。
3、显示碱性磷酸酶（APL）的钙钴法（Alkaline phosphohydrolase）
⑴酶的定位及其生物学意义：
ALP在碱性环境下能催化各种醇和酚的磷酸酯水解，参与磷酸根的跨膜转运过程，并有磷酸转移的作用，故在细胞膜上运输较活跃，如毛细血管内皮细胞，肾近曲小管刷状缘，肠上皮纹状缘等处，该酶的活性较高。
⑵原理：ALP将磷酸盐底物（如β-甘油磷酸钠等）分解产生磷酸根离子，后者为孵育液中的氯化钙捕获生成磷酸钙沉淀，但该沉淀为非金属盐，需加入硝酸钴，使其生成磷酸钴沉淀，因无色，再需通过硫化铵处理，形成棕黑色硫化钴沉淀而被显示。在PH9.2—9.4环境中表现最大活性。反应式如下：
ALPCa++
β-甘油磷酸钠磷酸离子Ca2(PO4)2
Co(NO3)2(NH4)2S
CO2（PO4）2CoS↓
（无色）（棕黑色）
⑶结果：酶活性部位为棕黑色CoS沉淀。
4、显示核酸的甲绿一派喏宁（Methyl green-pyronln）染色：
⑴原理：甲绿和派喏宁都是碱性染料，对两种核酸（DNA和RNA）能分别染色，其机制可能在于两种核酸分子都是多聚体，但聚合程度有所不同。甲绿具有两个带电荷的氨基，而派喏宁只有一个。因此在混合的染液中，二者竞争的结果是甲绿易与聚合程度较高的DNA结合呈现蓝绿色，而派喏宁则与聚合程度较低的RNA结合呈现红色。
（试剂制备及方法详见组织学技术专著）
⑶结果：核内DNA呈蓝绿色，核仁及胞质内RNA呈桃红色。
5、显示糖原的过碘酸雪夫氏（PAS）反应：
⑴原理：糖原是一种动物多糖，无色，富含于肝细胞和肌细胞胞质中。PAS反应（Periodic acid schiff Reaction）能在糖原所在部位生成紫红色物质，从而将之显示。RAS反应分为两步：首先是强氧化剂过碘酸（Periodic acid,分子式为HIO4），将糖原中的葡萄糖分子的C-C键打开，将CHOH-CHOH氧化，生成二醛基，然后Schiff试剂中的无色亚硫酸品红分子与糖的醛基结合，生成新的紫红色复合物。
HIO4schiff试剂
多糖醛基紫红色反应产物
（氧化）
（试剂配制及方法详见组织学技术专著）
⑵结果：糖原呈紫红色颗粒状。
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